2 报告基因转染法[7]
应用基因转染技术将原核或真核生物的报告酶如β-半孔糖苷酶（βgalactosidase，βgal）或荧光素酶（luciferase,luc）基因转染靶细胞，建立稳定转染靶细胞系，以此测定CTL、NK细胞及药物介导的细胞毒和细胞凋亡。通过测定释放入培养液中报告酶活性（代表靶细胞死亡数目），可以计算效应细胞杀伤靶细胞%。其中βgal半衰期较luc长，应用较为方便。本法①灵敏度高，自发释放背景低；②用不同告基因转染的细胞系可同时测定杀伤活性，结果互不干扰，还可通过转基因小鼠进行在CTL活性研究；③用不同的基因调控元件（如组织特异性的或活性可诱导的启动子）控制报告基因的表达，可进一步深入进行机理研究。其主要不足是建立报告基因稳定转染细胞系费时费力rb告基因在有些靶细胞难以转染或表达。
3 比色测定法
3.1 MTT（或MTS）还原法[8]
本法根据细胞代谢活动与活细胞数直接成比例的原理，通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细胞的死亡。氧化型MTT进入细胞后被线粒体脱氢酶还原生成蓝色formazan颗粒，经溶剂溶解后比色定量，其颜色深浅直接与活细胞数有关，与靶细胞对照孔比较可计算效应细胞杀伤靶细胞%。本法简便易行，无需预标靶细胞，与51Cr释放法比较相关性好，还可测定淋巴细胞增殖活性和NK细胞活性。MTT类似物MTS在细胞内还原的formazan产物具有水溶性，性质较稳定，其测定简单快捷，特别适合于大批量测定。微生物污染可导致本法假阳性结果。
3.2 LDH释放法[9]
酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。本法操作简便快捷，自然释放率低，可用于CTL及NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射引起的细胞毒性，现已有LDH法测定CTL活性试剂盒（promega）。应注意较高浓度FCS中所含LDH可能干扰结果。
4 其他
4.1 “鸡尾酒“混合刺激法[10]
Swincarski等介绍了一种测抗原特异性CTL活性方法，将外周血细胞在体外用一种含有抗原、细胞因子、共刺激分子及放射照射的饲养细胞的混合“鸡尾酒”刺激7天后，在有限稀释条件下可从微孔板快速测得抗原特异性信号。本法灵敏性高，较传统的CTL测定方法更有效，尤其是本法仅需150µl小鼠外周血而无需处死动物，因此可增加每次测定时的小鼠数量，还可在体内研究过程中于不同时间从每个小鼠多次取血测定，大大方便了CTL反应及其体内效果的相关性研究。
4.2 ELISPOT试验[11，12]
酶联免疫斑点试验（ELISPOT）通过检测抗原诱导的细胞因子（如IFN-γ）的分泌，可在体外定量测定病人PBMC中抗原特异性T细胞反应(T细胞受抗原刺激产生并释放IFN-γ)。本法在肽特异性分泌IFN-γ的T细胞数量与细胞毒活性之间，与标准的51Cr释放法相关良好，是一种在临床试验中监测病人对肿瘤抗原的CTL或Th-细胞反应的灵敏、准确、价廉、的方法，可对肿瘤病人的抗肿瘤疫苗疗法的优化提供必要的信息。
以上几种CTL测定方法各有特点，其中随着荧光测定仪器的普及和新的荧光标记物的发现，荧光测定法将有可能取代传统的51Cr释放法，而微量和直接测定体内CTL活性的方法将为细胞免疫研究开辟新路。
