高通量植物（转）基因检测的利器---植物材料直接PCR技术

众所周知，在正向遗传学的基因定位，植物品质和品种鉴定，或者是植物有效成分检测，以及转基因检测等，都需要高通量植物的DNA提取，然后PCR检测。尤其是在基因图位克隆中，需要构建一个大的群体（少则几千株，多则上万株），然后提取DNA，PCR方法筛选性状的连锁标记（SSR，RAPD等），最后测序克隆基因。传统方法在DNA提取中，都要液氮研磨样品，然后氯仿抽提，最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要几周的时间。一些公司进行改进，开发了相对简单些的方法，用96孔吸附板进行提取，完成整个实验也需要大约1个小时；也有些公司在96孔深孔板中加入钢珠或者其他比重大的金属小珠帮助破碎，直接裂解后取上清做PCR，能将时间缩短至半小时，但是需要借助专用的震荡器，而且钢珠的使用成本很高；也有的公司不借助钢珠，而提供小的研磨杵，在PCR管人工研磨后裂解取上清进行PCR，显然耗费的人工时间比较多，而且也容易相互污染。

以上的方法对于大规模的基因或转基因检测显然不理想，不仅时间长而且易污染！国内外很多知名的公司纷纷投入到改进新技术的研发中！北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（RP3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒（PR7501），该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其方便快捷。只需截取0.5-0.7厘米的植物叶片放入溶液L中，95℃孵浴10分钟，无需液氮研磨，然后加等体积溶液I，就可以直接进行PCR，方便快捷，是植物领域的科研工作者的最佳选择之一。

植物直接PCR试剂盒的特点有：
 在12 分钟内可以一步提取植物基因组DNA。
 不需要酚/氯仿抽提。
 不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA 的沉淀。
 含PCR MIX,裂解后取4ul就可以直接PCR。
 不需要上样缓冲液和染料。
 提取物在4℃可以保存6周。

实例1：
1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻叶片放入1.5ml 离心管中，加入100μl溶液L，确保叶片浸没在溶液中。
2、95℃孵育10 分钟，此时DNA已释放但叶片并没有明显的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。
4、PCR反应体系配制：

PCR体系	体积
抽提物	4μl
2×PCR MIX	10μl
上游引物	1μl
下游引物	1μl
水	4 μl
总体积	20μl

5、在PCR仪上进行如下反应：

94℃ 3min

94℃ 0.5-1min

50-65 C 0.5－1min 30-35个循环

72°C 0.5－2min

72°C 10 min

6、8%聚丙烯酰胺胶电泳，银染。

实例2：
提取、PCR同实例1。检测用2%的琼脂糖。