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流式细胞术Protocol

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发布时间:2015-10-25 9:22:42

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流式细胞仪是测定一个或重复的每个颗粒经光路的信号,因此,细胞必须做成单个细胞悬浮状态,不能聚集,也不允许有细胞碎片存在。所用染料必须特异(如特异单抗),而且不允许渗透至载液中。

标本如果是属于淋巴细胞等血细胞、骨髓细胞或白血病细胞系或类淋巴细胞系,要经Ficoll分离,作单细胞分离处理,但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞,需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等),化学法(EDTAEGTA和柠檬酸盐)消化分散液或洗液最好用无钙、镁PBS,柠檬酸盐的浓度为40μmol/L,并同时采用机械分散法,将经消化处理的膨松组织,用玻璃珠悬摇或用吸管吹打分散均可,用PBS23次后重悬,最好过一下尼龙或不锈钢网筛100μm20μm。细胞浓度要保证在1-2×106/mL

若标本用于测定单个细胞,需加入15 mg/LDNAase,将有助于阻止破碎细胞释放的DNA造成细胞再聚集,但是若分离的细胞要作DNA含量测定之用时,则切勿加DNAase